酶標(biāo)儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器。酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。
在酶標(biāo)儀正式運(yùn)行前,需要對(duì)其進(jìn)行自檢,下面我們來說說說其自檢包括哪幾方面。
(一)外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱,型號(hào),編號(hào),生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外表面無明顯機(jī)械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整。
(二)酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長(zhǎng),在吸光度o.0A處,測(cè)定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測(cè)定操作按儀器說明進(jìn)行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測(cè)定值之差不應(yīng)超過±0.00。
(三)吸光度測(cè)定的準(zhǔn)確度
選用405,492和620nm波長(zhǎng),以空氣為參比,分別測(cè)定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用測(cè)試板代替酶標(biāo)板,按儀器說明連續(xù)測(cè)定3次,按下式計(jì)算準(zhǔn)確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標(biāo)準(zhǔn)值)。
(四)吸光度測(cè)定的重復(fù)性
波長(zhǎng)選擇同(三),在酶標(biāo)板*排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測(cè)定5次。記錄每次測(cè)定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對(duì)應(yīng)孔吸光度值。
(五)酶標(biāo)儀的線性選用540nm波長(zhǎng),將標(biāo)稱值o.5,1.0A中性濾光片分別放入測(cè)試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復(fù)測(cè)定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測(cè)試板的同一孔位中,重復(fù)測(cè)定3次。
(六)測(cè)定速度的檢定 .
選用492nm波長(zhǎng),放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測(cè)定,用秒表計(jì)測(cè)儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間。酶標(biāo)儀除了在選購(gòu)時(shí),應(yīng)盡可能自檢外,在使用中也應(yīng)定期檢定,以保證酶標(biāo)儀測(cè)定的有效性。附:200ttg/ml重鉻酸鉀溶液的配制將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,在分析天平上準(zhǔn)確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,搖勻。