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腎上腺素(EPI)ELISA 試劑盒
在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
⑴已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
⑵酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
⑶酶的底物;
⑷陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
⑸酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;
⑹洗滌液;
⑺酶反應(yīng)終止液。
腎上腺素(EPI)ELISA 試劑盒
定量測定
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)值,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是理想的檢測區(qū)域。
測定小分子量物質(zhì)常用競爭法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對數(shù)關(guān)系,這更有利于測定系統(tǒng)的表達。
操作程序
1. 分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
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